РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ
(19)
RU
(11)
(13)
C2
(51) МПК
(52) СПК
  • A61K 31/095 (2006.01)
  • A61K2121/00 (2006.01)
  • A61K2123/00 (2006.01)
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ
Статус:
Пошлина:
действует (последнее изменение статуса: 26.04.2019)
учтена за 4 год с 03.10.2018 по 02.10.2019

(21)(22) Заявка: 2015141959, 02.10.2015

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:
02.10.2015

Дата регистрации:
05.03.2018

Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 02.10.2015

(43) Дата публикации заявки: 04.04.2017 Бюл. № 10

(45) Опубликовано: 05.03.2018 Бюл. № 7

(56) Список документов, цитированных в отчете о поиске: В.А. Галочкин и др. Органические и минеральные формы селена, их метаболизм, биологическая доступность и роль в организме // Сельскохозяйственная биология. - 2011. - N 4. - С. 3-15. RU 2317074 C1, 20.02.2008. RU 2281007 С2, 27.03.2005. WO 2012115538 A1,30.08.2012. А.А Демидов и др. Сенсибилизаторы на основе наноструктурированных селеносодержащих гетероциклов // С.овременные проблемы науки и образования. - 2013. - N 5. Н.А. Голубкина и др. Оценка селенового статуса организма при приеме селенопирана // Микроэлементы в медицине. - 2005. - N6(2). - С. 33-36.

Адрес для переписки:
249039, Калужская обл., г. Обнинск, а/я 9004, Базанову Ю.Б.

(72) Автор(ы):
Розиев Рахимджан Ахметджанович (RU),
Гончарова Анна Яковлевна (RU),
Еримбетов Кенес Тагаевич (RU),
Подгородниченко Владимир Константинович (RU),
Бондаренко Екатерина Валерьевна (RU)

(73) Патентообладатель(и):
Общество с ограниченной ответственностью "Л-ПДСК" (RU)

(54) Средство, обладающее одновременно протекторным действием в отношении здоровых органов и тканей и адъювантным действием при радио- и химиотерапии опухолей

(57) Реферат:

Изобретение относится к области фармацевтики, а именно к применению 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена в качестве средства, обладающего адъювантным действием при радио- и химиотерапии опухолей, и представляющего собой соединение структурной формулы (I)

Изобретение обеспечивает снижение в отношении здоровых органов и тканей негативного воздействия химио- и радиотерапии и при этом усиливает их действие на опухолевые клетки. 1 ил., 4 пр.,8 табл.


Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, и касается средства, обладающего адъювантным действием при радио- и химиотерапии опухолей.

Радио- и химиотерапия относится к основным, широко применяемым методам лечения онкологических заболеваний, но имеют существенные недостатки, связанные с наличием у них ряда серьезных побочных эффектов, обусловленных повреждающим действием на здоровые органы и ткани.

Расширению возможностей радио- и химиотерапии может способствовать применение соединений, защищающих нормальные клетки, позволяющих снижать повреждающее действие лучевой терапии и токсичность химиопрепаратов в отношении здоровых органов и тканей. Другой подход к повышению эффективности лучевой и химиотерапии может заключаться в использовании препаратов, потенцирующих действие ионизирующего излучения и химиотерапевтических препаратов, на злокачественную опухоль. Естественно, что предпочтение должно быть отдано тем соединениям, которые обладают одновременно тем и другим действием. Радио- и химиопротекторными свойствами обладают вещества с антиоксидантными свойствами, поэтому поиск среди них соединений с адъювантным действием кажется вполне логичным и обоснованным.

Имеется патент на изобретение, из которого следует, что аскорбиновая кислота и ее соли (аскорбаты) обладают адьювантным действием при химиотерапии опухолей [Патент WO 98/41204 Pascoe, F. Ascorbic as an adjvant in the treatment of malignan yumors using chemotherapy and radiotherapy]. Существенным дополнением к описанным адьювантным и противоопухолевым свойствам аскорбиновой кислоты является ее способность стимулировать гуморальные и клеточные звенья иммунной системы в присутствии ее ингибиторов. Аскорбиновая кислота и ее фармакологически приемлемые соли стабилизируют клеточные мембраны.

Цитотоксическое действие на раковые клетки высоких доз аскорбата, введенных парентерально, подтверждено в исследованиях Chen и соавт. «Pharmacologic doses of ascorbate act as prooxidant and decrease growth of aggressive tumor xenografts in mice» [Proceeding of the National Academy of Sciences] и Yan Ma и соавт. «High-dose parenteral ascorbate enhanced chemosensitivity of ovarian cancer and reduced toxicity of chemotherapy». [Sci. Transl. Med. 5 February 2014: Vol. 6, p. 222].

Однако данные о влиянии высоких доз аскорбиновой кислоты, применяемые в онкологии, на опухолевый процесс и защиту здоровых органов и тканей от воздействия химио- и радиотерапии весьма противоречивы. В ряде исследований показано, что высокие дозы аскорбиновой кислоты оказывают повреждающее действие на здоровые органы и ткани и тем самым ухудшают состояние больных и снижают эффективность химио- и радиотерапии [Шлянкевич М. (Йельский университет, США) Больше - не всегда лучше: избыток витаминов при лечении рака. Журнал "Вместе против рака" №3, 2000 г.; Harreus U., Baumeister P., Zieger S., Matthias C. The influence of high doses of vitamin С and Zinc on Oxidative DNA Damage. Anticancer Research 25: 3197-3202 (2005)].

Задачей изобретения является расширение арсенала средств, обладающих адъюватным действием при радио- и химиотерапии опухолей. Технический результат заключается в том, что применение предлагаемого соединения в онкологии в широком диапазоне доз обеспечивает снижение в отношении здоровых органов и тканей негативного воздействия химио- и радиотерапии и при этом усиливает их действие на опухолевые клетки.

Для решения поставленной задачи и для достижения заявляемого технического результата предлагается применение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена в качестве средства, обладающего адъювантным действием при радио- и химиотерапии опухолей, и представляющего собой соединение структурной формулы (I)

Новым в предлагаемом изобретении является то, что в качестве адъюванта при радио- и химиотерапии онкологических заболеваний может применяться соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен. Для специалиста это свойство явным образом не вытекает из уровня техники.

Содержанием настоящего изобретения является установление способности препарата в широком диапазоне доз при совместном и одновременном применении с радио- и химиотерапии усиливать их действие. Иными словами, при совместном применении препарат не защищает опухолевые клетки, а напротив, оказывает адьювантное действие.

Известно, что соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен обладает широким спектром фармакологического действия [Патент на изобретение №2281007 от 10.08.2006]. Соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен стимулирует иммунную систему и обладает адаптогенными свойствами, что повышает его ценность при лечении онкологических заболеваний. Будучи антиоксидантом, соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен потенциально способно защищать здоровые органы и ткани при радио- и химиотерапии онкологических заболеваний. Протекторное действие 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена может быть обусловлено не только его антиоксидантными свойствами, но и опосредованным вследствие способности молекулы препарата ингибировать дифференцировку низкодифференцированных клеток подобных стволовым [Патент на изобретение №2317074 от 16.03.2006]. Последний эффект наблюдается при предварительном введении препарата за 7 суток до действия радиации.

Предметом предлагаемого изобретения является средство, обладающее помимо ряда полезных фармакологических свойств одновременно протекторным действием в отношении здоровых органов и тканей и оказывающим адьювантный эффект при радио- и химиотерапии. При этом особое значение имеет выявление у изучаемого соединения по сравнению с аналогами антиоксидантного и прооксидантного действия. В связи с этим антиоксидантные и проксидантные свойства соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен в сравнении с существующими аналогами оценены в системе Фентона.

Сущность изобретения поясняется примерами конкретного выполнения и чертежом. На фиг. 1 представлено влияние дозы соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен на объем опухоли при лечении Цисплатином.

Пример 1. Нами были исследованы в системе Фентона антиоксидантные и проксидантные свойства аскорбиновой кислоты и Тролокса, который по своей химической структуре относится к водорастворимой форме витамина Е и широко используется в работах многих авторов в качестве стандарта при исследовании антиоксидатных свойств различных соединений. Однако данные ряда исследований, а также наши данные (табл. 1) показали наличие у Тролокса не только антиоксидантных, но и прооксидантных свойств. Другой часто используемый стандарт для оценки антиоксидантных свойств, а именно аскорбиновая кислота, оказался достаточно сильным прооксидантом (табл. 1). Приведенные в таблице 1 данные свидетельствуют о том, что в системе Фентона происходит генерация гидроксильного радикала ОН*. Соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен на 60-75% ингибирует генерацию гидроксильного радикала, что дает основание сделать вывод о наличии у этого препарата антирадикальной и антиоксидантной активности. Анализ концентрационной зависимости способности соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен ингибировать генерацию радикала ОН* показал, что эта активность остается постоянной при изменении концентрации препарата от 0,106 до 0,0106 мМ, что может быть связано с низкой растворимостью препарата в этих концентрациях.

Примечание * достоверное отличие от контроля (р<0,05)

Таким образом, в проведенных экспериментах у соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен не обнаружено наличие проксидантных свойств, что, наряду с высокой его антиоксидантной активностью, свидетельствует о перспективности использования этого препарата в качестве лечебно-профилактического лекарственного средства.

Поскольку адьювантное действие не связано с образованием свободных радикалов, препарат не обладает прооксидантным эффектом и его протекторное действие в отношении здоровых органов и тканей должно проявляться в полной мере за счет антиоксидантных свойств препарата.

Пример 2. Проведены исследования адъювантного эффекта соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена при химиотерапии опухолей. Целью исследований было изучение адъювантных свойств соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен в различных дозах и схемах введения и при его совместном действии с химиотерапевтическим препаратом по противоопухолевой и антиметастатической активности.

Исследования включали изучение противоопухолевых и антиметастатических свойств соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена в различных дозах вместе с традиционным химиопрепаратом Цисплатин.

В эксперименте были использованы 80 мышей-самцов F1(CBA×C57Bl/6) - по 15-20 в каждой группе. В заднюю лапку животных была имплантирована меланома В-16, в количестве 0,75×106 клеток (объем суспензии 0,2 мл). Клетки мышиной меланомы В-16, приспособленная к выращиванию в монослое (банк клеток ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина) культивировали в среде RPMI-1640 с добавлением антибиотиков (пенициллин-стрептомицин по 100 ЕД/мл), 10% эмбриональной телячьей (10% по объему) сыворотки при температуре +37°С в атмосфере, содержащей 5% СО2 [Культура животных клеток. Методы / Д. Конки и и др. / Под ред. Р. Фрешни. - М.: Мир, 1989. - 333 с]. В качестве культуральной посуды использовали стерильные матрацы площадью 75 см3 (Corning, Nunc). Пересев культуры проводился 3 раза в неделю.

Оба препарата вводились 3 раза; суммарные дозы и все экспериментальные группы указаны в таблице 2. Сроки введения обоих препаратов: 7, 11 и 15 сутки после имплантации. Химиотерапевтический препарат Цисплатин вводили внутрибрюшинно в дозе 3 мг/кг в 0,2 мл. Указанная доза была выбрана исходя из общепринятых в терапии злокачественных новообразований схем: коэффициент перехода от однократной дозы к дробному введению - 1,5. Исследуемое соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен вводиться per os (0,2 мл) в дозах: 5, 25 и 100 мг/кг. Контрольная группа получала 0,2 мл воды.

Противоопухолевое действие оценивалось по изменению объема опухоли, измерение которого проводилось на 7, 15 и 20 дни эксперимента. Объем новообразования оценивали по формуле эллипсоида (1) [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под общ. ред. Р.У. Хабриева. - М.: ОАО Издательство Медицина, 2005, с. 647].

В качестве дополнительного критерия служила выживаемость животных (оценивается на протяжении всего эксперимента).

где d1, d2, d3 - взаимно перпендикулярные размеры опухоли.

Антиметастатическая эффективность оценивалась по количеству метастазов в легких, которое определялось через 2 недели после начала введения препарата (20 день после имплантации). Для этого у декапитированных под наркозом животных извлекали легкие и переносили в жидкость Буэна. Подсчет метастазов производился визуально.

Статистическую обработку проводили с применением следующих подходов и критериев: однофакторного дисперсионного анализа, критерия Стьюдента (в том числе для выборок с различной вариацией), Уилкоксона, Колмогорова-Смирнова, а также χ2 и точного критерия Фишера для таблиц сопряженности. Парное сравнение групп проводили по критериям Тьюки и Стьюдента, с поправками Бонферрони, Хольма, Хочберга и др. Все расчеты проводили с помощь статистического пакета R (версия 2.15.0) в соответствии с современными руководствами по биологической статистике [Гланц С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц; пер. с англ. Ю.А. Данилова. - М.: Практика, 1998. - 459 с.].

Результаты исследований по изменению объема опухоли при введении в различных дозах соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен и традиционного химиопрепарата Цисплатин изображены на фиг 1.

Статистическая обработка результатов проводилось с использованием дисперсионного анализа и критерия Стьюдента. Первичный дисперсионный анализ показал статистически значимое отличие контрольной группы от всех других исследуемых групп (Р<0,01). Прямое сравнение групп с различными дозами соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен с группой Цисплатин показало, что достоверное отличие наблюдается при дозе 300 мг/кг (Р<0,02). Таким образом, введение соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен снижает рост опухоли, по сравнению с интактными и животными, получавшими химиотерапевтический препарат Цисплатин. Достоверное снижение объема при этом наблюдается после введение данного препарата в суммарной дозе 300 мг/кг. В некоторых случаях введение соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен приводило не только к задержке роста опухоли (за исключением случаев, связанных с серьезным повреждением кожных покровов), но, в одном из случаев, и к полной регрессии новообразования.

Другим, кроме объема опухоли, критерием служило количество метастазов в легких. Средние значение и разброс данных для каждой группы представлены в таблице 3. Дисперсионный анализ показал достоверное отличие групп между собой (Р<0,0001). Последующее применение теста Тьюки позволило установить, что 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен в суммарных дозах: 75 и 300 мг/кг достоверно снижает количество метастазов, по сравнению как с контрольными группами (1 и 2), так и с группой, где изучаемое соединение вводилось животным в меньшей дозе.

* Достоверное отличие от групп 1, 2 и 3 при Р<0,01.

Следует также отметить, что применение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена в суммарных дозах 75 и 300 мг/кг обеспечило у части животных полное отсутствие метастазов в легких, что не было отмечено для изучаемого соединения в суммарной дозе 15 мг/кг и при введении только Цисплатина.

Анализ влияния введения исследуемого соединения на количество погибших и выживших животных за период опыта показал значительные отличия. Введение соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена в суммарной дозе 300 мг/кг приводило к существенному снижению погибших мышей при увеличении количества выживших животных (таблица 4).

Таким образом, анализ полученных данных показал, что введение препаратов в обеих схемах (только химиопрепарат и совместное его введение с 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантеном в различных дозах) достоверно снижает объем опухоли уже через две недели после начала введения. Показано, что введение соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен снижает рост опухоли по сравнению с интактными и животными, получавшими химиотерапевтический препарат Цисплатин. Достоверное снижение объема при этом наблюдается после введение изучаемого соединения в суммарной дозе 300 мг/кг. Показано, что 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен в суммарных дозах: 75 и 300 мг/кг достоверно снижает количество метастазов по сравнению как с контрольными группами (1 и 2), так и с группой, где изучаемое соединение вводилось животным в меньшей дозе.

Пример 3. Исследован адъювантный эффект соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен в различных дозах по ингибированию роста и метастазирования перевитой опухоли легочной карциномы Льюис при локальном облучении в дозе 15 Гр и без облучения.

В исследованиях использовано 200 мышей-самок (CBA×C57Bl/6)F1, с массой тела 20-22 г., содержавшихся в стандартных условиях и на стандартном рационе на основе брикетированных кормов. Исследуемое соединение растворяли в 1% крахмальном геле и мышам вводили зондом внутрижелудочно с учетом массы тела животных. Группы животных, вводимые дозы и схемы введения препаратов приведены в таблице 5.

Приготовление и подсчет суспензии опухолевых клеток легочной карциномы Льюис и их перевивка осуществлялась подкожно в количестве примерно 1,6⋅106 в 0,1 мл (140 шт.). Формировали равноценные группы по размеру опухоли с возможной выбраковкой животных, с учетом групповых и индивидуальных меток.

На 10-е сутки роста опухоли осуществляли локальное облучение опухолевого узла в индивидуальных контейнерах из оргстекла γ-лучами 60Со на установке «Луч-1» (Россия), однократно в дозе 15 Гр. Измерение объема опухолевого узла мышей и подсчет его индекса роста проводили на 7, 14 и 21 сутки. Умерщвление мышей-опухоленосителей осуществляли на 14 сутки и 21 сутки.

Кроме того, в крови подопытных животных определяли содержание ретикулоцитов. При определении содержания в крови ретикулоцитов 20 мкл крови помещали в пробирку с 3,98 мл раствора В.Н. Петерса. Подсчет ретикулоцитов осуществляли при помощи оптической микроскопии (Olympus «СХ21», Филиппины).

Определение индекса роста опухолевого узла (ИР)

ИР=Vn/Vo (Vn - 14-e или 21-е сутки после перевивки клеток карциномы Льюис, Vo-замер опухолевого узла на 7 сутки роста опухоли).

Размер опухоли определяли: высотыширинудлину (мм3).

Подсчет количества метастазов на легком

Мышей умерщвляли дислокацией шейных позвонков. Извлекали легкие и фиксировали их в растворе Буэна, представляющем собой смесь насыщенного водного раствора пикриновой кислоты, формалина и ледяной уксусной кислоты в соотношении 15:5:1, а затем подсчитывали число макроскопически видимых на поверхности легкого метастазов.

Статистическая обработка результатов экспериментов

Для всех полученных вариационных рядов были подсчитаны средние арифметические значения и их стандартные ошибки. Для определения значимости межгрупповых различий были использованы параметрические критерии (t - критерий Стьюдента, F - критерий Фишера) и непараметрические (Вилкоксона-Манна-Уитни, медианный критерий Кси-квадрат р<0,05, если кси-квадрат >3,84 и ранговый критерий Вардена р<0,05, если значение >1,96). Различия между группами признавали статистически значимыми при значении интеграла вероятности р, не превышающем 0,05. Статистический анализ проводился с помощью программы Origin 6.0 («MicroCal Softwares США).

Результаты проведенных свидетельствуют, что соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен проявляет адъювантные свойства по ингибированию роста и метастазирования перевитой опухоли легочной карциномы Льюис при локальном облучении в дозе 15 Гр.

Мыши-опухоленосители (контроль)

Объем опухолевого узла у мышей этой группы к 21-м суткам роста достигает 4280 мм3. Индекс роста (ИР) опухолевого узла у мышей-опухоленосителей к 14-м суткам составлял 8, а к 21-м суткам 20. Количество метастазов на поверхности легких - 33±6.

Мыши-опухоленосители + облучение 15 Гр.

ИР опухолевого узла у животных этой группы снижается до 5. То есть локальное воздействие облучения в дозе 15 Гр приводит к ингибированию роста опухоли на 35%, а к 21 суткам на 46% ИР - 10,8 (объем опухолевого узла уменьшается в 1,9 раз - 2770 мм3). Количество метастазов на поверхности легких - 41±6 (табл. 6 и 7).

Соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен в дозе 5 мг/кг при самостоятельном применении и в сочетании с радиотерапией.

Соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен в дозе 5 мг/кг на 14-е сутки роста опухоли способен статистически значимо ингибировать ИР на 28% (ИР - 5,8), а сочетании с облучением на 51% (ИР 4). К концу срока наблюдения (21-е сутки) зарегистрировали тенденцию к снижению роста опухолевого узла при самостоятельном применении изучаемого соединения, а при совместном с локальным облучением - ИР статистически значимо ниже (8,4), чем в группе «Контроль +15 ГР» (10,8). Следует отметить, что количество видимых метастазов на поверхности легких в этих опытных группах не отличалось от соответствующих групп контроля.

Соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен в дозе 100 мг/кг при самостоятельном применении и в сочетании с радиотерапией (15 Гр)

При лечении мышей-опухоленосителей соединением 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен в дозе 100 мг/кг зарегистрировали тенденцию к снижению роста опухоли (ИР на 14-е сутки роста опухоли - 6,5, а на 21-е - 16,8). В комплексе с радиотерапией отмечается наибольшее (статистически значимое) торможение роста опухоли на 14-е сутки - 52% (ИР - 3,9), а на 21-е сутки 61% (ИР - 7,9). В этой группе «соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен в дозе 100 мг/кг на 3 сутки +15 Гр» отмечается не только подавление роста первичного очага опухоли, но и статистически значимое ингибирование метастазирования на 39%. На 21-е сутки количество метастазов на поверхности легких - 25, тогда как в группе «Контроль +15 Гр» - 41.

Соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен курс = 300 мг/кг (100 мг/кг на 5, 10 и 14 сутки) + 15 Гр

При данной схеме лечения мышей обнаружено не только статистически значимое замедление роста опухолевого узла на 14-е сутки на 52% (ИР - 3,9), а на 21-е на 58% (ИР - 8,4), но и статистически значимое снижение количества метастазов в легких на 32% (табл. 6 и 7).

* значимость различий (р≤0,05) по отношению к показателям группы «Контроль»;

# значимость различий (р≤0,05) по отношению к показателям группы «Контроль +15 Гр»

Р<0,05, если х2>3,84 или X>1,96

* значимость различий (р≤0,05) по отношению к показателям группы «Контроль»;

# значимость различий (р≤0,05) по отношению к показателям группы «Контроль + 15 Гр»;

Р<0.05, если x2>3,84 или X>1,96.

Таким образом, 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен в изолированном применении статистически значимо увеличивает количество ретикулоцитов к 21 суткам после перевивки опухоли, что свидетельствует о наличии у данного соединения гемостимулирующих свойств в отношении эритропоэза.

Соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен оказывает влияние на снижение темпов роста легочной карциномы Льюис. При изолированном применении данного соединения наблюдается тенденция к снижению ИР опухоли, которая прослеживается как на 4, так и на 11 сутки после локального облучения (14 и 21 сутки после перевивки опухоли соответственно). При этом статистически значимое снижение ИР опухоли выявляется на 4 сутки после локального облучения (14 сутки после перевивки опухоли) при применении соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен в дозе 5 мг/кг массы тела мыши. В случае применения изучаемого соединения в сочетании с локальным облучением опухоли в дозе 15 Гр, во всех исследованных случаях ИР опухоли статистически достоверно снижен по сравнению с группой, подверженной локальному облучению без применения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена.

Соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен влияет на уровень метастазирования легочной карциномы Льюис. Применение соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен в высоких дозах (100 мг/кг однократно и курс 300 мг/кг) на фоне радиотерапии статистически значимо снижает количество метастазов в легких. Примечательно, что соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен, проявляя антиоксидантные свойства при применении одновременно с локальным облучением опухоли, не приводит к снижению эффективности радиотерапии, в отличие от большинства других антиоксидантов.

Полученные данные в целом свидетельствуют о наличии у 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена радиомодифицирующих свойств, что указывает на целесообразность дальнейшей разработки данного соединения в качестве адъюванта радиотерапии. Наблюдаемое в отдаленные сроки увеличение количества ретикулоцитов свидетельствует о возможной активации эритропоэза под действием соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен.

Пример 4. Проведены исследования протекторного действия соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен по способности защищать хромосомы лимфоцитов человека от генотоксического действия ионизирующего излучения.

В in vitro экспериментах была оценена способность соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен защищать геном лимфоцитов человека от генотоксического действия ионизирующего излучения, в том числе и при облучении лимфоцитов на наиболее радиочувствительной G2 стадии клеточного цикла. Для проведения цитогенетического анализа хромосомных аберраций в лимфоцитах использовали гепаринизированную кровь, которую получали от доноров обоего пола. Эритроциты осаждали с помощью желатины, а плазму, содержащую лейкоциты, отделяли от осадка и смешивали с тремя объемами культуральной среды. Состав культуральной среды: 80% среды RPMI с глютамином, антибиотиками и 20% сыворотки крупного рогатого скота. Лимфоциты в периферической крови представляют естественно синхронизированную популяцию клеток, более 90% которых находится в состоянии покоя на стадии G0. Для стимуляции деления лимфоцитов использовали ФГА фирмы «ПАНЭКО», Россия в концентрации 10-20 мг на 1 мл культуральной среды. Культуру лимфоцитов инкубировали при 37°С в течение 48 часов в присутствии 5% СО2. Как показали специальные исследования, эти условия обеспечивали максимальное содержание в культуре лимфоцитов, находящихся на G2 стадии. За 2 часа до окончания инкубации для накопления метафазных пластинок в среду добавляли демекальцин. Через 2 часа клетки осаждали центрифугированием, гипотонизировали 0.075 М хлористым калием и фиксировали смесью ледяной уксусной кислоты и абсолютного спирта (соотношение 1:3). Цитологические препараты готовили, нанося суспензию фиксированных клеток на предметное стекло с последующим высушиванием над пламенем и окраской азур-эозином. На препаратах подсчитывали аберрации хромосомного и хроматидного типа, определяли процент метафаз с аберрациями.

Соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен в конечной концентрации 0,0044% вносили в среду для культивирования за 30 минут до облучения и оставляли на 2 часа в среде с облученными на стадии G2 клетками до их фиксации. При облучении клеток на стадии G0 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен вносили в суспензию находящихся в стационарной фазе клеток за 30 минут до облучения, облучали и затем инкубировали изучаемое соединение с облученными клетками при 37°С с 5% СО2 - в течение 24 часов до фиксации клеток. В таблице 8 приведены полученные результаты цитогенетических исследований.

Результаты цитогенетического анализа показали, что дозы облучения 0,5 Гр и 1 Гр достоверно увеличивают уровень повреждения хромосом у клеток, облученных на стадий G2 клеточного цикла без и в присутствии соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен. Результаты дисперсионного анализа показали, что соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен достоверно (р=0,033) защищает геном клеток лимфоцитов человека от генотоксического действия ионизирующего излучения (табл. 8).

Примечание.x) достоверное (Р<0,05) отличие от данных, полученных при облучении без соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен;

*)достоверное (Р<0,05) отличие от данных, полученных при анализе необлученных образцов.

Защитное действие соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен в отношении тканей продемонстрировано в его способности достоверно снижать частоту образования хромосомных аберраций в лимфоцитах из периферической крови человека.

Соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен при совместном, одновременном применении с химиопрепаратами и облучением не защищает опухолевые клетки от действия излучения и химиотерапии. Этот эффект вероятно связан с цитостатическим действием соединения 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен.

Таким образом, соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен можно рекомендовать в качестве средства, обладающего адъювантным действием при радио- и химиотерапии опухолей.

Предлагаемое изобретение расширяет арсенал средств, обладающих адъювантным действием при радио- и химиотерапии опухолей.

Формула изобретения

Применение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена в качестве средства, обладающего адъювантным действием при радио- и химиотерапии опухолей, и представляющего собой соединение структурной формулы (I)